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熒光定量PCR的優(yōu)點 2020-07-21

普及一下熒光定量PCR的幾個優(yōu)點：1、使用特異性探針對定量分子進行識別，具有很高的準確性。同時靶序列由引物和探針雙重控制，特異性好、假陽性低。2、熒光PCR檢測技術(shù)是綜合了PCR技術(shù)、熒光標記技術(shù)、激光技術(shù)、數(shù)碼顯象技術(shù)為一體的技術(shù)，因此檢測靈敏度高。3、熒光信號的產(chǎn)生和每次擴增產(chǎn)物成一一對應(yīng)的關(guān)系，通過熒光信號的檢測可以直接對產(chǎn)物進行定量；定量范圍可在0－1010拷貝/毫升。4、擴增和檢測可以在同一管內(nèi)檢測，一步完成，不需要開蓋，不易污染。5、速度快、高通量，可在2－3小時... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑-叔丁醇 2020-07-19

叔丁醇被大家認為是適合制劑的凍干溶劑。有如下特點：凝固點高，純的叔丁醇在室溫下（25℃）就可以凍結(jié)。叔丁醇的蒸汽壓較高有利于升華，節(jié)省凍干時間。叔丁醇毒性低，在凍干過程中，大部分叔丁醇可在一次干燥階段升華，在制劑中殘留量很低。叔丁醇自身在凍結(jié)中形成針狀結(jié)晶，能改變?nèi)苜|(zhì)的結(jié)晶方式，利于升華。叔丁醇也可在熒光PCR試劑當凍干保護劑使用。叔丁醇起到加快凍干進程和改善凍干微觀結(jié)構(gòu)的作用。凍干前的熒光PCR反應(yīng)混合物原液中的濃度范圍為：叔丁醇的濃度為10%-40%（v/v）。熒光PCR... 查看更多
熒光PCR凍干保護劑篩選方法 2020-07-19

熒光PCR凍干體系篩選范圍:糖類、醇類、氨基酸類、聚合物類、大分子蛋白、無機鹽類等，其組分為其中的幾種的組合。優(yōu)化方法：沒有經(jīng)驗采用單一因素法，有一定經(jīng)驗的采用多因素法。單一因素法篩選出保護效果比較好的保護劑，再將保護效果好的保護劑進行組合，產(chǎn)生終配方。因此，初步篩選采用單因素法，進一步篩選采用多因素法。我們不但能提供適合熒光PCR凍干的試劑凍干機Pilot10-15T，還能為用戶提供對藥品、診斷試劑、蛋白、多肽、酶、抗體、抗原等進行凍干工藝優(yōu)化，包括保護劑優(yōu)化、凍干曲線優(yōu)化... 查看更多
熒光定量PCR實驗時的好方法 2020-07-18

實時熒光定量PCR技術(shù)實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，具有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，成為核酸分子定量的標準方法。在做熒光定量PCR實驗時建議使用這些耗材：96孔光學反應(yīng)板配合光學膜，0.2ml光學八聯(lián)反應(yīng)管配合光學膜，0.2ml光學八聯(lián)反應(yīng)管配合平蓋的光學八聯(lián)管蓋等。在做熒光定量PCR實驗時有一些好的方法分享給大家，例如在使用單管或者8連管做實驗時，如果在樣本數(shù)量不多的時候，建議在樣品加熱塊（TRAY）上對稱的安放樣品，并且先放在第6列或者第7列... 查看更多
實時定量PCR之定量 2020-07-17

實時定量PCR不僅操作簡便、快速高效，而且具有很高的敏感性和特異性。廣泛地運用于分子生物學的各個領(lǐng)域。實時定量PCR在應(yīng)用中有一些使用人對定量的方法上覺得存在著不容易克服的問題主要包括1.定量的方法與眾多因素有關(guān)，如水、緩沖液、儀器性能等，乃至于核酸的抽提過程都會影響到結(jié)果的穩(wěn)定性。2.標準品的穩(wěn)定保存很難獲得成功，高濃度的核酸物質(zhì)易于被降解，而每次配制新的標準品又會增加批間差異。3.每次測定樣本都要同時測定標準品，而熱循環(huán)儀的樣本孔有限，所以在單批內(nèi)不能測定更多的樣本，這樣... 查看更多
凍干熒光PCR試劑之反應(yīng)管 2020-07-15

凍干熒光PCR試劑凍干方法是將熒光PCR試劑經(jīng)過預凍，在真空狀態(tài)下進行升華，后可制備成凍干粉。凍干熒光PCR試劑時，選用的反應(yīng)管在做凍干時有許多不足之處：1.由于反應(yīng)管呈上寬下窄的錐字形，還需要借助其他工具支撐，這樣反應(yīng)管試劑與凍干機擱板的接觸面積很小，升華時傳熱會受到限制，延長了預凍和升華的時間，反應(yīng)管中的凍干程序一般在24～30小時，凍干制品日產(chǎn)量很低。2.反應(yīng)管中的凍干，在加入凍干混合試劑后，需要進行離心處理，排出氣泡，并將粘附在反應(yīng)管壁上的試劑離心下來。3.反應(yīng)管中的... 查看更多
熒光定量PCR的效率值 2020-07-15

熒光定量PCR的效率值可通過標準曲線獲取。理想的反應(yīng)效率為100%。效率較高（高于110%）一般說明反應(yīng)過程中存在抑制作用。引起抑制作用的原因主要是RAN或者DNA質(zhì)量較差，模板濃度過高及含有核酸鈍化的殘余物。反應(yīng)效率較低（低于90%）的原因有試劑濃度不適（主要是引物、鎂、Taq、DNA、聚合酶、尤其是在多重試驗中）。造成效率低的其他因素有引物Tm之間的差異超過5℃或者是熱循環(huán)條件不適。抑制作用和較低的效率會影響分析的靈敏度，導致動態(tài)范圍減小及通用性降低。怎樣解決呢？可在做凍... 查看更多
淺談熒光PCR凍干芯片的方法 2020-07-14

熒光PCR凍干芯片的制備方法簡單快速，易于操作，縮短凍干所需時間，一般可在八小時內(nèi)完成凍干步驟。熒光PCR凍干芯片的制備方法示例,1.先要稱取制備凍干保護劑如海藻糖、棉子糖、右旋糖酐、甘油、焦磷酸二乙酯處理過的水，置于容器中混合均勻，然后加熱至*溶解，在放入2～8℃冷卻。2.預混熒光定量PCR試劑如將PCR反應(yīng)緩沖液、引物、探針、dNTPs和DNA聚合酶混合均勻；將預混的熒光定量PCR試劑和凍干保護劑混合均勻（體積比為3:1），制備成凍干試劑；取5～8μL的凍干試劑點在微流控... 查看更多

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